57
阅读
0
评论
分享
临床研究
脂蛋白脂酶基因突变(C310R/E396V)导致高三酰甘油血症的家系研究
中华内分泌代谢杂志, 2017,33(08): 656-661. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6699.2017.08.006
摘要
目的

本课题拟在细胞水平上对我们新发现的两个脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase, LPL)基因突变p.C310R(c.T928C)和p.E396V(c.A1187T)进行分子机制研究,有助于构建我国家族性高三酰甘油血症患者的LPL基因突变型与表型关系谱,为高危人群提供精准早期诊断,同时为基因靶向治疗药物开发提供依据。

方法

提取先证者全体家族成员的外周血DNA,利用全外显子测序技术确定LPL突变位点,然后通过一代测序进行验证。细胞实验构建携带该突变基因位点的慢病毒表达载体,转染COS-1细胞,通过ELISA和酶荧光法分别检测细胞上清和裂解液内LPL的浓度和活性。通过RT-PCR检测该突变对于基因转录水平影响。

结果

全外显子测序结果显示先证者的LPL基因6号外显子有一个新的c.T928C杂合子突变(p.C310R),而其侄女则携带两个复合杂合子突变,其中一个突变位点与先证者相同,另一个突变位点位于8号外显子c.A1187T的突变(p.E396V)。细胞实验结果表明这两种突变均可以造成分泌出胞外的LPL活性下降,浓度减低(P<0.05)。进一步的研究发现,C310R突变可以影响LPL基因转录后修饰,而E396V突变则影响LPL在细胞内转运。

结论

这两个位点的突变均为致病性基因突变,其最终通过减少分泌的LPL浓度和活性,影响体内三酰甘油的正常代谢。

引用本文: 伦语, 孙晓方, 王萍, 等.  脂蛋白脂酶基因突变(C310R/E396V)导致高三酰甘油血症的家系研究 [J]. 中华内分泌代谢杂志,2017,33( 8 ): 656-661. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6699.2017.08.006
正文
作者信息
基金  关键词  主题词
English Abstract
评论
阅读 57 引用 0
相关资源
视频 0 论文 0 大综述 0
以下内容和版式版权归属中华医学会,未经授权不得转载 ×

众所周知,当空腹血中三酰甘油水平大于10 mmol/L,血浆中的乳糜微粒就开始增加,乳糜微粒增高是导致急性胰腺炎的重要原因[1,2]。高三酰甘油血症病因可以分为原发性和继发性。原发性高三酰甘油血症较罕见,是由于参与三酰甘油代谢的蛋白质基因突变引起的,包括LPL、载脂蛋白C-II (apolipoprotein C-II, APOC2)、载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,APOA5)、脂酶成熟因子1(lipase maturation factor 1,LMF1)、糖基磷脂酰肌醇锚定的高密度脂蛋白结合蛋白1(glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1,GPIHBP1)[3]。其中,LPL基因突变为常染色体隐形遗传,占原发性高三酰甘油血症病因的90%以上[4]

人的LPL基因位于第8号染色体,包含10个外显子,共编码448个氨基酸[5,6]。目前为止,已经发现114个LPL基因突变可以导致高三酰甘油血症,但大部分的突变位于高度保守的4、5和6号外显子[7]。基于目前尚未研究出LPL三维结构,唯一的方法只能通过研究LPL突变基因的功能来构建基因型-表型关系谱。

LPL主要在骨骼肌、心肌和脂肪组织合成[8],可以水解游离乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的三酰甘油成分,释放的游离脂肪酸储存于脂肪组织或者直接参与供能[9]。LPL经实质细胞合成后,分泌至细胞膜,肝素使其与细胞膜分离,LPL进入细胞外液,在GPIHBP1帮助下,LPL跨毛细血管内皮细胞,锚定在毛细血管管腔中发挥脂解作用[10]

本研究中,我们发现一个由于LPL基因突变表现为严重高三酰甘油血症的家系。先证者为杂合子,LPL基因6号外显子发生C310R突变,先证者的侄女为复合杂合子,LPL基因同时发生6号外显子C310R和8号外显子E396V突变。这两个位点的LPL基因突变均为世界上首次报道。之后,我们在细胞水平上对这两个全新突变位点进行功能研究,以明确该突变导致家族性高三酰甘油血症的发病机制。

对象和方法
一、 对象
1.细胞系的获取:

COS-1细胞购自广州吉妮欧生物科技有限公司。细胞基础培养基为DMEM,完全培养基配方为10%胎牛血清,1%双抗,1%碳酸氢钠,90%DMEM,放置于37℃,5% CO2的恒温培养箱中培养,根据细胞生长情况每2~3天传代1次。

2.试剂:

0.25%胰蛋白酶、HBSS、DMEM培养液、胎牛血清均购自美国Hyclone公司,DMSO购自美国Sigma公司,细胞裂解液购自碧云天公司,全血基因组DNA快速提取试剂盒、EASY spin细胞RNA快速提取试剂、逆转录试剂盒、2×Taq PCR MasterMix、2×Sybr Green qPCR Mix购自北京艾德莱生物科技有限公司,PCR引物由生工生物工程上海股份有限公司合成,Human LPL ELISA Kit购自英国Neo Scientific公司,LPL Activity Assay Kit购自美国Sigma公司。

二、 方法
1.生化指标检测:

19位家系成员抽空腹血进行甲状腺、肝肾功、自身免疫性疾病相关指标检测,排除可以引起继发性高三酰甘油血症的疾病。脂代谢相关指标检测包括三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度胆固醇(HDL)、低密度胆固醇(LDL)、游离脂肪酸(FFA)和脂蛋白(a)[Lp(a)]。

2.测序:

用全血基因组DNA快速提取试剂盒提取家系成员的外周血DNA,委托北京诺禾致源科技股份有限公司进行全外显子测序,根据测序结果对相应突变的外显子进行PCR扩增,PCR扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳分离,紫外透视仪下确认扩增产物是目的条带,无杂带,空白对照无污染。PCR扩增产物委托生工生物工程上海股份有限公司进行一代测序。引物序列如下:外显子8引物为5′-GCCGGATCCG-ATCTCTATAACTAACCAAATTTATTGCT-3′和5′-TCCC-TGCAGTGGGGGTCTUAGTGAAGGAAGAAAA-3′;外显子6引物为5′-AGAGGATCCTTCTGCCGAGATACAAT-CTTGGTGTC-3′和5′-AGGCTGCAGGACTCCTTGGTTT-CCTTATTTACAACA-3′。

PCR反应体系(25 μl):2 μl模板DNA,上下游引物各1.5 μl,12.5 μl Mix,7.5 μl双蒸水。反应条件:95℃预变性3 min,95℃变性30 s,57℃退火30 s,72℃延伸45 s,共进行38个循环,72℃最终延伸10 min。

3.慢病毒转染:

(1)委托上海吉玛公司构建含有LPL突变位点的慢病毒表达载体LPL-wt(野生型)、LPL-310、LPL-396、LPL-310396、LV5(空载体),并包装成慢病毒进行滴度检测。(2)慢病毒转染:6孔板每孔接种3×104 COS-1细胞,加入培养基2 ml,过夜培养。感染前吸取培养基,每孔加入50 μl 108 TU/mL病毒,再加入1 950 μl培养基,2 μl Polybrene,八字混匀。24 h后更换新鲜培养基,2天后荧光显微镜下观察荧光表达情况。待细胞表达出荧光后,将细胞用胰酶消化下来,用5 μg/ml含嘌呤霉素的培养基筛选稳定转染的细胞,之后正常进行细胞培养。

4.RT-PCR检测LPL在细胞中的表达:

用细胞RNA快速提取试剂盒提取稳定转染的COS-1细胞RNA,逆转录后进行荧光定量PCR,取1 μl逆转录产物,加入12.5 μl 2×SYBR qPCR Mix,上下游引物各0.5 μl,用双蒸水补足体积至25 μl。内参使用18s rRNA。引物序列如下:LPL引物为5′-GCGTGATTGCAG-AGAGAGGAC-3′和5′-TCAGGCAGAGTGAATGGGATG-3′;18S rRNA引物为5′-GGAAGGGCACCACCAGGAGT-3′和5′-TGCAG-CCCCGGACATCTAAG-3′。反应条件:94℃预变性3 min,95℃变性10 s,65℃ 60 s,共进行40个循环,97℃ 1 s。

5.ELISA检测LPL基因突变对酶浓度影响:

(1) 取5×106个稳定转染的COS-1细胞种100 mm培养皿,培养2.5天后,去除上清,用5 ml PBS清洗3遍,加入0.5 ml培养基和1.6 μl肝素,每次孵育10 min,共进行3次,收集上清,上清一共1.5 ml,10 000×g离心10 min。剩余的细胞加入裂解液431 μl,肝素1.4 μl,冰上裂解30 min,裂解产物离心取上清。(2)采用Human LPL ELISA Kit,样品孔分别加入50 μl细胞上清和50 μl裂解产物。(3)除了空白孔外每孔均加入50 μl HRP-conjugate reagent,混匀后置入37℃保温箱孵育60 min。(4)每孔加入350 μl Wash solution清洗5遍。(5)加入50 μl Chromogen Solution A和50 μl Chromogen Solution B,轻轻混匀后,避光在37℃保温箱中孵育15 min。(6)每孔加入50 μl Stop solution终止反应,立即在450 nm波长下测量OD值。

6.酶荧光法检测LPL基因突变对酶活性影响:

采用LPL Activity Assay Kit(美国sigma公司)进行检测,样品孔分别加入5 μl细胞上清和5 μl裂解产物,空白孔加入相同体积的Assay Buffer,混匀,37℃水浴60 min。在激发光波长370 nm和发射光波长450 nm下检测LPL活性。

三、 统计学处理

采用SPSS 23.0进行数据分析,计量资料多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、 患者病史简介及检查结果

先证者,男性,48岁,2型糖尿病史10年,因血糖控制不佳2014年入我院治疗,当时化验三酰甘油23.97 mmol/L,总胆固醇8.3 mmol/L,低密度脂蛋白5.64 mmol/L。患者2002年至2005年先后发作4次胰腺炎,每次均为饮酒及高脂饮食后发作。饮酒史30年,日饮白酒500 ml。其妹妹和侄女均有胰腺炎反复发作病史。家中无自身免疫性疾病史,胆结石和药物滥用史。

先证者2014年三酰甘油浓度最高达23.97 mmol/L(表1)。出院后低脂饮食,非诺贝特100 mg tid联合胰岛素治疗,血糖血脂均控制良好,1个月复查时三酰甘油降低至1.33 mmol/L。然而,由于该患者无明显不适,遂自行停用降脂药物,因此,半年后复查三酰甘油升高至6.67 mmol/L,此后三酰甘油水平持续增高,最近一次复查为10.65 mmol/L。

表1

家系成员血脂水平

Tab 1

Lipid biochemistry of the proband and his family members

表1

家系成员血脂水平

Tab 1

Lipid biochemistry of the proband and his family members

家系成员Family memberTG(mmol/L)TC(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)Lp(a)(mg/L)FFA(mmol/L)
Ⅰ-223.978.300.755.64363
Ⅱ-122.2016.340.501.703980.96
Ⅰ-12.594.191.152.49
Ⅰ-33.135.511.093.57
Ⅲ-10.873.201.221.75
正常参考范围Normal range0.3-1.922.32-5.620.8-1.81.9-3.120-3000.1-0.45

注:TG:三酰甘油Triglyceride;TC:总胆固醇Total cholesterol;HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇High-density lipoprotein-cholesterol;LDL-C:低密度脂蛋白Low-density lipoprotein-cholesterol;Lp(a):脂蛋白(a) Lipoprotein(a);-:未检测Not tested

先证者侄女(Ⅱ-1)曾因急性胰腺炎发作入我院急诊治疗,CT如图所示(图1)。2014年检查三酰甘油22.20 mmol/L,总胆固醇16.34 mmol/L。自述从17岁初次急性胰腺炎发作,每年反复发作6~7次,曾服用过非诺贝特和蒲参胶囊治疗,但效果均不佳。结合两位患者的疾病特点分析,我们考虑家族性高三酰甘油血症,其三酰甘油极度增高与脂代谢相关基因功能缺陷有关。

图1
上腹部CT示急性胰腺炎
Fig 1
Abdominal computed tomography was highly suggestive of acute pancreatitis
图1
上腹部CT示急性胰腺炎
Fig 1
Abdominal computed tomography was highly suggestive of acute pancreatitis
二、 测序结果与家系图

我们提取先证者和侄女的外周血DNA进行全外显子测序,结果发现先证者的LPL基因存在一个新的6号外显子c.T928C突变,该突变导致编码的半胱氨酸转变为精氨酸(p.C310R);侄女则为复合杂合子突变,其中一个突变位点与先证者相同,另一个新的突变位于8号外显子c.A1187T突变,这种突变使编码的谷氨酸被缬氨酸替代(p.E396V)。两个突变位点均为全新的错义突变,该结果已被美国国立生物信息中心(NCBI)临床基因变异数据库(SCV000262583,SCV000262584)收录。除此之外,我们还在先证者基因组中检测到GPIHBP1基因(rs11538389)和APOA5基因(rs201229911)的单核苷酸多态性(SNP),在侄女基因组中检测到LMF1基因SNP(rs142481016),以上这3种基因虽然均参与三酰甘油代谢,但根据最新的全基因组关联研究结果可以发现,这3个SNP均不会引起高三酰甘油血症[3]。而且,除了这3个SNP以外,不存在其他脂代谢相关基因突变,排除了其他突变基因引起家族性高三酰甘油血症的可能性。

随后,我们提取家系其他成员外周血DNA,对LPL基因的6号和8号外显子进行一代测序,以明确突变基因在家系中的分布情况。部分测序结果见图2。我们根据测序结果绘制了家系图(图3)。为排除6号和8号外显子突变为SNP的可能,我们检测了100个正常人的LPL基因,均未发现这两个位点的突变。

图2
LPL基因测序结果
Fig 2
LPL gene sequencing diagram

注:(A)先证者6号外显子正向测序结果Forward sequence of exon 6 in the proband;(B)侄女8号外显子逆向测序结果Reverse sequence of exon 8 in the proband′s niece;(C)正常人对照A control subject

图2
LPL基因测序结果
Fig 2
LPL gene sequencing diagram
图3
家系图
Fig 3
Pedigree diagram of the family
图3
家系图
Fig 3
Pedigree diagram of the family
三、 LPL基因突变对转录的影响

提取稳定转染的COS-1细胞RNA,逆转录后,进行RT-PCR检测。结果发现LPL-310、LPL-396、LPL-310396与LPL-wt的mRNA表达水平相同(P>0.05,图4),说明我们发现的LPL基因的两个新的突变位点(C310R/E396V)均不影响LPL基因转录。

图4
提取转染不同慢病毒的COS-1细胞RNA,与内参18s rRNA对比
Fig 4
Quantitation of extracted mRNA and normalized to 18S rRNA
图4
提取转染不同慢病毒的COS-1细胞RNA,与内参18s rRNA对比
Fig 4
Quantitation of extracted mRNA and normalized to 18S rRNA
讨论
四、 LPL基因突变对酶活性、浓度影响

通过ELISA和酶-荧光法分别检测转染了不同慢病毒的COS-1细胞培养液和裂解液中LPL的浓度和活性。结果发现与LPL-wt相比,细胞培养液中的LPL-310、LPL-396和LPL-310396活性均明显降低(P<0.05),特别是LPL-310396的活性比LPL-wt降低了1倍(表2),而LPL-310、LPL-396和LPL-310396的浓度低于检测水平下限,说明仅有微量的LPL经肝素孵育后分泌入胞外。值得注意的是,细胞培养液中的LPL-310396的活性和浓度与空载体LV5相比无明显差异(P>0.05),也就是说,转染LPL-310396的COS-1细胞不能分泌LPL。然而,细胞裂解液中的结果却与之相反,LPL-310396的活性和浓度与LPL-wt相比增高1.5倍(P<0.01,表2)。我们推测,由于该复合突变抑制LPL细胞内转运,导致细胞合成的LPL不能分泌入胞外,在细胞内积累引起细胞裂解液中LPL浓度和活性显著增高。同样,细胞裂解液中的LPL-396的浓度和活性与LPL-wt相比也轻度增高(P<0.05)。然而,裂解液中LPL-310浓度和活性与LPL-wt相比明显降低(P<0.05)。除此之外,我们可以发现裂解液中LPL浓度和LPL活性成正比。因此我们校正了LPL浓度对其活性的影响,计算出LPL特异性活性,结果发现细胞裂解液中LPL-wt和LPL-310、LPL-396、LPL-310396相比无明显差异(表2)。总之,我们推测LPL E396V突变可能影响LPL转运至细胞表面,而LPL C310R突变抑制LPL合成,二者均引起分泌的LPL的浓度和活性降低。

表2

细胞水平LPL野生型和突变型浓度和活性

Tab 2

The activity and mass of LPL wild-type and mutants in transfected COS-1 cells

表2

细胞水平LPL野生型和突变型浓度和活性

Tab 2

The activity and mass of LPL wild-type and mutants in transfected COS-1 cells

种类 Plasmids (n=6)细胞培养液 Medium细胞裂解液 Cell lysate
活性Activity(nmol/ml)浓度Mass(pg/ml)活性Activity(nmol/ml)浓度Mass(pg/ml)特异性活性Specifc activity(nmol/pg)
LPL-wt2.71±0.4215.51±3.2510.10±2.1540.46±2.870.25±0.05
LPL-3102.00±0.31aND7.09±2.16a24.61±2.33b0.28±0.11
LPL-3962.00±0.64aND12.25±1.71a50.76±4.29a0.25±0.04
LPL-3103961.29±0.16bND15.17±1.53b58.16±4.33b0.25±0.02
LV51.49±0.24bND4.31±1.32b17.19±3.35b0.26±0.08

注:活性和浓度用±s表示The activity and mass values are shown as ±s;ND:检测不出Not detectable;aP<0.05, bP<0.01

我们系统研究了一个由于LPL基因突变导致的高三酰甘油血症家系,携带LPL基因突变的家族成员除了Ⅲ-1外(年龄太小),均表现为中至重度的三酰甘油增高,而且先证者(Ⅰ-2)和其侄女(Ⅱ-1)均有急性胰腺炎反复发作的病史。基因测序结果发现先证者和其妹妹(Ι-3)LPL基因6号外显子均有一个新的c.T928C,该突变使编码的氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸(p.C310R)。而先证者的侄女为复合杂合子突变,既有6号外显子T928C突变,也有8号外显子c.A1187T突变,后者编码的氨基酸由谷氨酸变为缬氨酸(p.E396V)。体外研究发现LPL C310R和LPL E396V突变均导致分泌至胞外的LPL活性下降,继而引起三酰甘油代谢异常。虽然细胞合成的LPL-310总量与LPL-wt相比明显降低,但RT-PCR结果发现LPL-310的mRNA含量与LPL-wt mRNA相比无明显差异,说明LPL C310R突变对转录水平无影响,但影响LPL基因转录后修饰。进一步研究发现,细胞培养液中LPL-396和LPL-310396浓度降低的原因在于LPL E396V突变抑制LPL在细胞内转运,导致大量的LPL-396、LPL-310396积聚在细胞内,只有极少量的LPL能分泌至胞外,甚至低于检测下限,LPL活性也因此随之减少。值得注意的是,细胞裂解液中LPL突变型活性的高低取决于LPL突变型浓度的大小,我们去除浓度对于活性的影响后,可以发现裂解液中LPL突变型的活性与LPL野生型相比无明显差异。

已知实质细胞合成LPL后,将其转运至细胞表面,LPL需要与肝素结合才能脱离实质细胞,进入细胞外液,然后在GPIHBP1的作用下,跨毛细血管内皮细胞,在毛细血管管腔发挥脂解作用[11]。N端第279-282个氨基酸和第292-304个氨基酸是LPL的肝素结合位点,C端的肝素结合位点在第319、403、405、407、413-414个氨基酸[12],而我们新发现的LPL C310R突变靠近N端肝素结合位点,LPL E396V突变靠近C端肝素结合位点,并且C310R突变引起编码的氨基酸电荷发生改变,由原来中性的半胱氨酸变为带正电荷的精氨酸,E396V突变使编码的氨基酸由带负电荷的谷氨酸变为中性的缬氨酸。通过电荷改变,可以影响LPL构象的稳定性,尤其这两个突变位点还在肝素结合位点周围,我们有理由相信在肝素结合位点附近的氨基酸电荷改变不仅可以影响LPL构象的稳定性还可以导致LPL与肝素的亲和力降低。这就可以解释为什么在肝素孵育后,LPL-310、LPL-396、LPL-310396均表现为活性下降。Buscà等[13]学者还发现LPL的C端结构域对于LPL在粗面内质网中的修饰起到重要作用,若从第388个氨基酸开始截断LPL,会使LPL不能与内质网分离,积聚在细胞内,从而不能分泌至胞外。我们的研究结果与此相同,LPL-396、LPL-310396可能就是因为C端突变不能与内质网分离而导致其在细胞内聚集,胞内LPL的活性和浓度均显著增高。我们的实验结果同样证明C端对于分泌的LPL活性表达具有重要作用。

总之,我们首次报道了两个全新的LPL C310R和LPL E396V突变,这两个突变均可以导致严重的高三酰甘油血症。基于目前尚未研究出LPL三维结构,唯一的方法只能通过进行LPL突变基因的功能研究来推测LPL构象变化。

参考文献
[1]
YuanG, Al-ShaliKZ, HegeleRA. Hypertriglyceridemia: its etiology, effects and treatment[J]. CMAJ, 2007, 176(8): 1113-1120. DOI: 10.1503/cmaj.060963.
[2]
KhokharAS, SeidnerDL. The pathophysiology of pancreatitis[J]. Nutrition in clinical practice: official publication of the American Society for Parenteral and Enteral Nutrition, 2004, 19(1): 5-15. DOI: 10.1177/011542650401900105
[3]
LewisGF, XiaoC, HegeleRA. Hypertriglyceridemia in the genomic era: a new paradigm[J]. Endocr Rev, 2015, 36(1): 131-147. DOI: 10.1210/er.2014-1062.
[4]
ChokshiN, BlumenscheinSD, AhmadZ, et al. Genotype-phenotype relationships in patients with type I hyperlipoproteinemia[J]. J Clin Lipidol, 2014, 8(3): 287-295. DOI: 10.1016/j.jacl.2014.02.006.
[5]
LookeneA, Bengtsson-OlivecronaG. Chymotryptic cleavage of lipoprotein lipase. Identification of cleavage sites and functional studies of the truncated molecule[J]. Eur J Biochem, 1993, 213(1): 185-194.
[6]
OkaK, TkalcevicGT, NakanoT, et al. Structure and polymorphic map of human lipoprotein lipase gene[J]. Biochim Biophys Acta, 1990, 1049(1): 21-26.
[7]
BrahmAJ, HegeleRA. Chylomicronaemia—current diagnosis and future therapies[J]. Nat Rev Endocri, 2015, 11(6): 352-362. DOI: 10.1038/nrendo.2015.26
[8]
CryerA. Tissue lipoprotein lipase activity and its action in lipoprotein metabolism[J]. Int J Biochem, 1981, 13(5): 525-541.
[9]
WangH, EckelRH. Lipoprotein lipase: from gene to obesity[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2009, 297(2): E271-E288. DOI: 10.1152/ajpendo.90920.2008.
[10]
DaviesBS, BeigneuxAP, BarnesRH, et al. GPIHBP1 is responsible for the entry of lipoprotein lipase into capillaries[J]. Cell Metab, 2010, 12(1): 42-52. DOI: 10.1016/j.cmet.2010.04.016.
[11]
TianGP, ChenWJ, HePP, et al. [Current progress in lipoprotein lipase and atherosclerosis[J]. Sheng Li Ke Xue Jin Zhan, 2012, 43(5): 345-350.
[12]
LookeneA, NielsenMS, GliemannJ, et al. Contribution of the carboxy-terminal domain of lipoprotein lipase to interaction with heparin and lipoproteins[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2000, 271(1): 15-21. DOI: 10.1006/bbrc.2000.2530.
[13]
BuscàR, MartínezM, VilellaE, et al. The carboxy-terminal region of human lipoprotein lipase is necessary for its exit from the endoplasmic reticulum[J]. J Lipid Res, 1998, 39(4): 821-833.
 
 
关键词
主题词
脂蛋白脂酶
高三酰甘油血症
急性胰腺炎